Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF 2091.
Статьи и работы по химии / Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii / Получение препаратов протеиназы penicillium wortmannii 2091 и исследование их физико-химических свойств. / Статьи и работы по химии / Исследование некоторых физико-химических свойств протеиназы Penicillium wortmannii / Получение препаратов протеиназы penicillium wortmannii 2091 и исследование их физико-химических свойств. / Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF 2091. Разработка условий выделения препарата Penicillium wortmannii BKMF 2091.
Страница 1

Для выделения ферментов из различных сред в лабораторных условиях и в промышленности чаще всего применяют органические растворители и нейтральные соли.

Эффект осаждения белков органическими растворителями, как известно [7], основан на явлении уменьшения сольватации полярных групп фермента. Молекулы воды, расположенные на гидрофобных участках поверхности белка, могут быть замещены на молекулы органического растворителя. При этом растворимость белков падает, происходит агрегирование и осаждение белковых молекул.

В качестве осадителей использовали 96,5% этанол, 98,0% изопропанол, химически чистый ацетон и сульфат аммония. Органические растворители и сульфат аммония добавляли к охлажденной до 0 – 4oС культуральной жидкости Pen. Wortmannii 2091 при различных значениях рН и постоянном перемешивании. Образовавшийся осадок отделяли центрифугированием, растворяли в небольшом объёме дистиллированной воды и определяли протеолитическую активность.

Результаты исследования влияния рН на полноту осаждения протеолитического комплекса при концентрации растворителей 60% представлены на рис. 1, из которого видно, что оптимальным является значение рН 7,5 при использовании всех видов органических растворителей. Вероятно, изоэлектрическая точка для данного фермента лежит в этой области рН.

В дальнейшем нами проводились исследования по влиянию концентрации органических растворителей на выход фермента при оптимальном значении рН. Наблюдалось монотонное осаждение фермента при последовательном увеличении концентраций осадителей, выход фермента возрастал до определённого предела (табл. 1).

Как видно из табл. 1, концентрация органических растворителей значительно влияет как на выход протеолитического комплекса, так и на степень его очистки. При использовании этанола наиболее эффективной для выхода ПА была концентрация 72,0%. Степень очистки 1,27. Максимальный выход 98,5% по активности.

Оптимальная концентрация ацетона 66,6% (в объёмных соотношениях 1: 2). Степень очистки была более высокой, чем для этанола (1,5 раза) – однако выход по активности всего 62%. Лучшим органическим осадителем для протеиназы Pen. Wortmannii 2091 явился изопропанол. При концентрации его в смеси 50% выход протеиназы составил 90, 5%, степень очистки 2,78 и удельная активность 3,06.

Таким образом, изопропанол избирательно осаждает протеолитические ферменты, что повышает степень их очистки и снижает содержание баластных примесей. Однако на практике вполне можно использовать и этанол.

В дальнейшем проведены исследования по осаждению протеиназы сульфатом аммония. Было установлено, что при оптимальных условиях (степень насыщения 0,8 рН 7,5) выход фермента составил всего 23%. Низкий вы-

Рис. 1. Влияние величины рН на осаждение протеолитического

комплекса различными растворителями:

ось абсцисс – величина рН;

ось ординат – выход по активности в %;

1 – этанол; 2 – изопропанол; 3 – ацетон.

Таблица 1

Получение препарата протеиназы из культуральной жидкости Penicillium wortmannii 2091

осаждением органическими растворителями.

Содержание осадителя

Общая активность, ед

Белок, мг/см3

Общий белок, мг

Вес препаратов, мг

Удельная активность, ед/мг белка

Выход по активности, %

Очистка

В объёмных отношениях

В %

Ацетон

Культуральная жидкость рН 7,5

-

-

2,5

2,250

62,5

-

1,10

100,0

1,00

1:1

50

179,0

0,180

21,6

120

0,99

17,4

0,90

1:2

66,6

222,0

0,133

46,4

349

1,67

62,0

1,50

1:3

75,0

213,0

0,233

51,9

223

0,91

38,0

0,82

1:4

80,0

203,0

0,216

64,6

299

0,94

49,0

0,85

Изопропанол

Культуральная жидкость рН 7,5

-

-

2,5

2,250

62,5

-

1,10

100,0

1,00

1:1

50,0

392,0

0,128

36,9

288

3,06

90,5

2,78

1:2

66,6

385,4

0,232

67,4

290

1,65

92,0

1,50

1:3

75,0

215,0

0,282

211,5

350

0,76

60,0

0,69

1:4

80,0

183,0

0,132

42,2

320

1,39

46,0

1,26

Этанол

Культуральная жидкость рН 7,5

-

-

2,5

2,250

62,5

-

1,10

100,0

1,00

1:1

48,0

320,3

0,396

85,1

215

0,80

55,0

0,73

1:2

64,0

366,7

0,340

90,1

265

1,08

77,6

0,98

1:3

72,0

385,4

0,276

135,2

320

1,40

98,5

1,27

1:4

80,0

349,6

0,250

160,0

335

1,40

93,7

1,27

Страницы: 1 2

Смотрите также

Билеты по химии 10 класс
...

Обезжелезивание воды
Данное исследование проводилось в рамках школьного химико-биологического проекта «Многоликое железо». Проект реализуется в течение учебного года силами учащихся десятых и одиннадцатых кла ...

Фальсификация бензинов
Фальсификация в России автомобильного топлива - национальная тра­диция. Говорят, сейчас только в странах Западной Европы можно заправить­ся настоящим бензином, отвечающим всем необходимым тр ...