В экспериментальной части курсовой работы была поставлена задача подобрать опытным путем хроматографическую колонку на основе химически модифицированного силикагеля для методики количественного определения эналаприла малеата, а также сравнить эффективность хроматографического разделения в зависимости от используемого сорбента.

Структурная формула эналаприла приведена на рис. 2.5 [20].

Рисунок 2.5. Структурная формула эналаприла

Субстанция эналаприла малеата представляет собой белый кристаллический порошок, плохо растворимый в воде, растворимый в этаноле и метаноле. Эналаприла малеат является биологически активным веществом, применяемым в качестве лекарственного средства для лечения артериальных гипертензий и застойной сердечной недостаточности, а также в комплексной терапии инфаркта миокарда.

Оборудование:

- весы аналитические электронные Mettler Toledo AG204;

- ультразвуковой очиститель Elma T710DH;

- жидкостной хроматограф Agilent 1100, соединенный с персональным компьютером.

Материалы:

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем цианосилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Waters RP-CN;

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем цианосилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Zorbax XDB-CN;

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Waters Symmetry C18;

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем октасилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Waters Symmetry C8;

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем октасилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Zorbax SB C8;

- колонка размером 4,6х250 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Zorbax SB C18;

- колонка размером 4,6х150 мм, заполненная циркония оксидом для хроматографии [19], с размером частиц 5 мкм Discovery ZR-РBD;

- мерная колба вместимостью 25 мл;

- микропипетка автоматическая 100–250 мкл.

Реактивы:

- ацетонитрил для хроматографии CH3CN [19];

- вода для хроматографии [19];

- дикалия гидрофосфат K2HPO4 [19];

- кислота фосфорная концентрированная H3PO4 [19];

- субстанция эналаприла малеата C20H28N2O5·C4H4O4.

Методика [21]:

Испытуемый раствор. Близко 100 мг (точная навеска) субстанции эналаприла малеата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 20 мл воды для хроматографии, доводят объем раствора водой для хроматографии до метки и перемешивают. 2,5 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора подвижной фазой до метки и перемешивают. Срок годности раствора – 1 сутки.

Буферный раствор. 1,74 г. дикалия гидрофосфата растворяют в 800 мл воды, доводят рН до значения 2,0±0,1 [19] кислотой фосфорной, доводят объем водой для хроматографии до 1000,0 мл и перемешивают.

Хроматографируют 10 мкл раствора сравнения на жидкостном хроматографе с УФ-детектором при таких условиях:

- подвижная фаза – буферный раствор – ацетонитрил для хроматографии (75:25), дегазированная на ультразвуковом очистителе;

- скорость подвижной фазы 1,5 мл/мин;

- детектирование при длине волны 215 нм;

- температура колонки 60оС.

Хроматографическая система считается пригодной, если:

- число теоретических тарелок, рассчитанное по пику эналаприла, не менее 6000;

- коэффициент симметрии пика эналаприла не более 1,7.