Иногда удается провести разделение на обращенной фазе таким образом, что основные компоненты образца элюируются со временем, близким к t0, а микропримеси удерживаются на колонке, что облегчает их количественное определение. Оценка содержания микропримеси наиболее надежна, когда ее пик регистрируется до пика преобладающего в образце компонента. Элюирование пика микропримеси на хвосте преобладающего компонента сильно ухудшает ее количественное определение. Любое хроматографическое разделение на колонке приводит к разбавлению образца. При анализе микропримесей возникает проблема разделения при минимальном разбавлении. Степень разбавления введенного образца может быть выражена уравнением

С макс/С0 = VsN0,5/[Vr(2π)0,5],

где Смакс – Концентрация, соответствующая максимуму пика; С0 – исходная концентрация в образце; Vs – вводимый объем; N – число теоретических тарелок для данной колонки; Vr – удерживаемый объем микропримеси.

Из уравнения видно, что снижения степени разбавления. а значит, увеличения чувствительности определения микропримеси можно достигнуть за счет увеличения вводимого объема, ^использования колонки с большим числом теоретических тарелок или за счет снижения объема удерживания микропримеси. К увеличению N ведет применение эффективных колонок, заполненных частицами с размером менее 10 мкм. При анализе микропримесей желательно применение коротких колонок (5–10 см) с размером частиц 3–5 мкм.

Большое влияние при анализе микропримесей оказывает изменение селективности системы и повышение коэффициента разделения а

, что достигается изменением состава подвижной фазы и выбором оптимального хроматографического режима. Кроме того, как видно из уравнения

Cмакc/С0 =(α–1)/α

изменение селективности может значительно снизить степень разбавления пика.