Коллагеназную активность определяли по содержанию оксипролина в смеси, образовавшегося в результате действия фермента на нативный коллаген. С этой целью готовили реактив для окисления: 28,2 г хлорамина Т растворяли в 40см3 воды для получения 0,05М концентрации, добавляли 60см3 ацитат-цитратного буфера с рН 6,0. К 2см3 анализируемой пробы, содержащей 2 - 20 см3 оксипролина, приливали 1мл реактива для окисления, встряхивали и оставляли на 20 минут при комнатной температуре. Затем в смесь вносили 2 – 1 см3 4М хлорной кислоты, встряхивали и через 5 минут приливали 3см3 10% раствора n-диметиламинобензальдегида в метилцеллосольфе. Пробу нагревали 15 минут в водяной бане при 150оС и после охлаждения фотометрировали с зелёным светофильтром на ФЭК-56М (555нм).
Гидролиз коллагена вели в следующих условиях: 20 мг нативного коллагена обрабатывали исследуемым ферментным препаратом в присутствии буферной системы с рН 7,0 так, чтобы общий объём составил 25см3. Смесь инкубировали в течение 1 часа при 37oС. Контролем служили пробы, инкубированные в тех же условиях, но без фермента, предварительно остановив реакцию внесением 0,5см3 этанола и центрифугированием смеси в течение 15 минут при 6000 ч×мин-1.
Активность коллагеназы выражали либо в ммолях оксипролина на 1 мг белка за 60 минут, либо в процентах растворения.
Индуктивно-связанная плазма
Атомно-эмиссионная
спектроскопия с индуктивно связанной плазмой это весьма популятный, простой и
точный метод анализа. Суть его в том, что при возбуждении и ионизации с
последующим переходо ...
Бериллий и сплавы, содержащие бериллий. Свойства, применение в химической технологии
Применяемые
в промышленности и быту металлические изделия редко состоят из чистых металлов,
примером является алюминиевая или медная проволока с процентным содержанием
металла около 99,9%, ...
Химические элементы, их связи и валентность
Мир химии
существует миллиарды лет. Химические явления сопровождают всю нашу жизнь и даже
определяют саму возможность ее существования.
Вторая половина
XX века ознаменовала новый виток р ...