Процесс выделения какого-либо белка начинается с переведения белков ткани в раствор. Для этого ткань (материал), из которой получают фермент, тщательно измельчают в гомогенизаторе в присутствии буферного раствора. Для лучшего разрушения клеток к материалу добавляют кварцевый песок, если материал растирают в ступке. В результате получают кашицу - гомогенат. Если не проводилось предварительное фракционирование органоидов клетки, гомогенат содержит обрывки клеток, ядра, хлоропласты и другие органоиды клеток, растворимые пигменты и белки.
При выделении ферментов из тканей живых организмов, в том числе растительных, необходимо соблюдать условия, не вызывающие денатурацию белка. Все работы проводят при пониженной температуре (40С) и при оптимальных для данного фермента значениях pH среды буферного раствора.
После перевода ферментов из ткани в растворенное состояние гомогенат подвергают центрифугированию для отделения нерастворимой части материала, а затем в отдельных фракциях экстрата-центрифугата выделяют следуемые ферменты.
Так как все ферменты являются белками, то для получения очищенных препаратов ферментов применяются те же способы выделения, что и при работе с белками.
Методы выделения:
· осаждение белка органическими растворителями;
· высаливание;
· метод электрофореза;
· метод ионообменной хроматографии;
· метод центрифугирования;
· метод гельфильтрации;
· метод аффинной хроматографии, или метод хроматографии по сродству;
· избирательная денатурация.
Свойства элементов, применяемых в
полупроводниковой технике.
Цель
работы - изучение свойств элементов III-V групп главных подгрупп
и некоторых их соединений.
В
главных подгруппах III-V групп периодической системы элементов расположены Р -
элементы, сред ...
Индуктивно-связанная плазма
Атомно-эмиссионная
спектроскопия с индуктивно связанной плазмой это весьма популятный, простой и
точный метод анализа. Суть его в том, что при возбуждении и ионизации с
последующим переходо ...
Заключение
В
заключение несколько слов о галогенах как об элементах в клетках нашего
организма.
Фтор
постоянно входит в состав животных и растительных тканей; микроэлементов. В
виде неорганических соедин ...