Качественные реакции

Раствор витамина В12 имеет характерный спектр поглощения в ультрафиолете с максимумами при 278, 361 и 548 нм и коэффициентами поглощения в указанных точках соответственно 115, 207 и 64, причем коэффициент поглощения при 361 нм для препаратов обычной очистки превышает в 2,8—3,4 раза коэффициент поглощения при 548 нм.

Количественное определение

І.Спектрофотометрический метод. В растворах ампулированных препаратов в кювете спектрофотометра (в 1 см толщины) определяют коэффициент поглощения при 548 нм. Содержание витамина В12 в 1 мл испытуемого раствора вычисляют по формуле. Количество витамина В12 в микрограммах где Е — наблюдаемый коэффициент поглощения; 64 — коэффициент поглощения для 1%-ного раствора витамина В12, т. е. при содержании 1000 микрограммов в 1 мл; 104 — коэффициент пересчета концентрации витамина В12 с 1% в микрограммы на 1 мл.

2. Колориметрический метод. При отсутствии спектрофотометра пользуются фотоэлектроколориметром с зеленым светофильтром. Содержание витамина В12 в испытуемом образце определяют путем измерения коэффициента поглощения. По найденному коэффициенту, пользуясь калибровочной кривой, устанавливают какое количество витамина В12 ему соответствует. Для составления калибровочной кривой для колориметра ФЭК берут растворы чистого витамина В12 с содержанием 10, 15, 20, 25 и 30 мкг в 1 мл и определяют коэффициенты поглощения, пользуясь кюветами в 1 см толщиной.

Откладывая по оси абсцисс содержание витамина В12, а по оси ординат коэффициенты поглощения, строят калибровочную кривую, по которой и отсчитывают, какому количеству витамина В12 соответствует коэффициент поглощения испытуемого образца.