При обработке хитозана бифункциональными соединениями происходит образование поперечных связей между двумя макромолекулами хитозана, причем в образовании этой связи участвуют гидроксильные группы элементарных звеньев макромолекулы хитозана.

При образовании даже небольшого числа поперечных связей свойства хитозанового материала существенно изменяются. Были проведены исследования зависимости свойств получаемых продуктов от числа, длины и места образования поперечных связей[47].

Простейшим примером образования поперечных связей является реакция между хитозаном и формальдегидом. Если хитозан обработать водным раствором формальдегида, происходит, по-видимому, образование метилол. Хитозана без одновременного образования поперечных связей. Эта реакция обратима. Химическим методом и методом инфракрасной спектроскопии было показано, что в определенных условиях (в кислой среде и при повышенной температуре) происходит взаимодействие формальдегида с двумя макромолекулами хитозана с образованием формаля, т. е. диоксиметиленового мостика. Образование поперечных связей может происходить при нагревании хитозана в парах формальдегида в присутствии борной кислоты. В этих условиях борная кислота образует комплексы, что приводит к повышению ее степени диссоциации. Обычно при проведении реакции в парах в качестве катализатора применяют сильные кислоты, или соли типа хлористого цинка [48]. Образование диоксиметиленового мостика может происходить в безводной среде, например в ацетоне или в серной кислоте, а также при добавлении формальдегида к ацетилирующей смеси (ацетаты могут быть затем омылены с сохранением поперечных связей). Однако обычно Хитозан обрабатывают водным раствором формальдегида и прогревают в присутствии катализатора при повышенной температуре[49].