Определение пектиновых веществ спектрофотометрический методом с отолуидиновым реагентом
Учим химию / Определение уроновых кислот и полиуронидов / Учим химию / Определение уроновых кислот и полиуронидов / Определение пектиновых веществ спектрофотометрический методом с отолуидиновым реагентом Определение пектиновых веществ спектрофотометрический методом с отолуидиновым реагентом
Страница 1

Методика анализа. Навеску измельченной древесины или другого растительного сырья массой около 1 г помещают в грушевидную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 40 см3 1%-ного раствора цитрата аммония и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке в течение I ч. Полученный раствор отфильтровывают горячим через конусообразную стеклянную воронку с бумажным фильтром в мерную колбу на 100 см3. Попавшие на фильтр частицы древесины смывают новой порцией 1%-ного раствора цитрата аммония и повторяют обработку. Остаток древесины в колбе и на фильтре промывают небольшим объемом горячей дистиллированной воды и присоединяют промывные воды к раствору в мерной колбе. После охлаждения колбы с раствором до 20°С его объем доводят до метки дистиллированной водой.

Для проведения гидролиза полиуронидов и полисахаридов отбирают пипеткой 5 см3 раствора пектиновых веществ в кругло-донную колбу вместимостью 25 см3, добавляют пипеткой 5 см3 раствора серной кислоты концентрацией 4 моль/дм3, вносят стеклянные «кипятильники» и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке в течение 3 ч.

Гидролизат охлаждают до комнатной температуры и нейтрализуют равным объемом раствора карбоната натрия концентрацией 2 моль/дм3. Нейтрализацию из-за сильного вспенивания проводят в высокой пробирке. Можно нейтрализовать не весь, а только часть гидролизата, достаточную для последующего анализа.

Для проведения анализа углеводных компонентов в пробирку с конусом типа П4 вместимостью 10 см3 пипеткой вносят 0,5 см3 нейтрализованного гидролизата, добавляют пипеткой 4 см3 о-толуидинового реагента и перемешивают содержимое. Параллельно в другой пробирке готовят раствор сравнения. Обе пробирки нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем пробирки охлаждают до комнатной температуры, переливают растворы в кюветы с толщиной слоя 1 см3 и на спектрофотометре измеряют оптические плотности раствора при аналитических длинах волн 365, 385 и 630 нм, используя в качестве раствора сравнения смесь воды и OTP.

В такой же кювете измеряют оптическую плотность контрольного раствора — нейтрализованного гидролизата, разбавленного в 9 раз для учета разбавления при анализе с OTP при длинах волн 365 и 385 нм, используя в качестве раствора сравнения дистиллированную воду.

Для расчета коэффициентов поглощения строят градуировочные графики для используемого спектрофотометра по растворам чистых Сахаров

Вывод уравнений и расчет коэффициентов. В применении к анализируемому раствору Сахаров уравнения Фирордта будут иметь вид

где D36S и D385 — оптические плотности анализируемого раствора

при длинах волн 365 и 385 нм за вычетом поглощения гекеоз; с, и 'Ci—концентрации соответственно пентоз и галактуроновой кислоты, мкг/см3;— коэффициенты поглощения продуктов реакции с OTP пентоз и галактуроновой кислоты при длинах волн 365 и 385 нм; d — толщина кюветы, см, d= 1 см.

Решая систему двух уравнений, получают уравнения для расчета концентрации, мкг/см3, пентоз

C = ZiD385 -SD365

и галактуроновой кислоты

2=CD365 — EDis5,

где соответствующие коэффициенты будут равны

Расчет массовой доли

пектиновых веществ.

После расчета концентрацией, мкг/см3, галактуроновой кислоты Ci, пентоз Cl и гекеоз рассчитывают массы полисахаридов и полиуронидов с учетом общего объема раствора пектиновых веществ, разбавлений з при гидролизе и нейтрализации и коэффициентов пересчета моносахаридов в полисахариды:

Страницы: 1 2