Изучение роста и биосинтеза бас полученными штаммами
Библиотека / Разработка методов биотехнологического получения белков, аминокислот и нуклеозидов, меченных стабильными изотопами 2Н и 13С с высокими степенями изотопного обогащения / Библиотека / Разработка методов биотехнологического получения белков, аминокислот и нуклеозидов, меченных стабильными изотопами 2Н и 13С с высокими степенями изотопного обогащения / Изучение роста и биосинтеза бас полученными штаммами Изучение роста и биосинтеза бас полученными штаммами
Страница 2

Как и следует из литературных данных (Складнее Д. А, 1990), введение стабильного изотопа углерода |3С не приводит к летальным последствиям для клетки, что мы и наблюдали в случае с М. flage/talum. В целом, полученные для М. flagellatum данные могут свидетельствовать о том, что адаптация к тяжёлой воде определяется как видовой специфичностью метилотрофных бактерий, так и особенностями их метаболизма. Кроме этого, из таблицы 1 следует, что данный подход можно эффективно использовать для введения в молекулы синтезируемых БАС двойной изотопной метки (дейтерий- и изотоп углерода 13C).

Изучение ростовых и биосинтетических характеристик Б.

methylicum

на средах, содержащих

CH

3

OH

/

CD

3

OD

и

D2O.

Данные по росту исходного и адаптированного к тяжёлой воде штамма В. methylicum и максимальному уровню накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости на минимальных средах с добавкой 2 об.% метанола и его дейтерированного аналога СН3

O

Н/

CD

3

OD

,

содержащих ступенчато увеличивающиеся концентрации тяжёлой воды, представлены в таблице 2.

Как видно из табл. 2, в отсутствии дейтерий-меченных субстратов продолжительность лаг-фазы не превышала 24 ч (см. табл. 2, опыт 1). С увеличением концентрации тяжёлой воды в среде продолжительность лаг-фазы увеличивалась до 64,4 ч на средах с 98 об.% тяжелой водой и 2 об.% CD3OD (табл. 2, опыт 10). Отмечено, что длительность времени клеточной генерации с увеличением степени изотопного насыщения среды дейтерием постепенно увеличивается, достигая 4,9 часов на максимально дейтерированной среде (табл. 2, опыт 10).

Таблица 2.

Влияние изотопного состава среды на рост штамма В. mehylicum

и уровень накопления L-фенилаланина в культуральной жидкости*.

Номер Компоненты среды, об% лаг-фаза Выход Время Выход опыта биомассы генер. L-Phe, Н2 О D2O СH3ОН CD3OD ч % ч %

1

98

0

2

0

24,0

100

2,2

100

2

98

0

0

2

30,3

92,3

2,4

99,1

3

73,5

24,5

2

0

32,1

90,6

2,4

96,3

4

73,5

24,5

0

2

34,7

85,9

2,6

97,1

5

49,0

49,0

2

0

40,5

70,1

3,0

98,0

6

49,0

49,0

0

2

44,2

60,5

3,2

98,8

7

24,5

73,5

2

0

45,8

56,4

3,5

90,4

8

24,5

73,5

0

2

49,0

47,2

3,8

87,6

9

0

98,0

2

0

60,5

32,9

4,4

79,5

10

0

98,0

0

2

64,4

30,1

4,9

71,5

10'

0

98,0

0

2

39,9

87,2

2,9

95,0

Страницы: 1 2 3 4 5